Kvantifikacija nukleinskih kislin v spektrofotometrih
Kvantifikacija nukleinskih kislin je najpogosteje uporabljena funkcija spektrofotometra. Oligonukleotide, enovalentna, dvojno vijačna DNA in RNA lahko kvantificiramo v puferih. Absorpcijski vrh največjega absorpcijskega vrha nukleinske kisline je 260 nm. Vsaka nukleinska kislina ima drugačno molekulsko sestavo in zato ima različne konverzijske faktorje. Za količinsko opredelitev različnih vrst nukleinskih kislin vnaprej izberite ustrezne koeficiente. Absorbanca 1OD je na primer enaka 50 μg / ml dsDNA, 37 μg / ml ssDNA, 40 μg / ml RNA in 30 μg / ml Olig. Vrednost absorbance po preskusu se pretvori z zgornjim koeficientom, da se doseže ustrezna koncentracija vzorca. Pred testiranjem izberite pravilen postopek, vnesite količine osnovne raztopine in razredčila ter preizkusite slepe in vzorčne rešitve. Vendar poskus ni bil enostaven. Nestabilni odčitki so lahko največji glavobol za preizkuševalce. Višja je občutljivost instrumenta, večji je razpon absorbančnega pomika.
Načrtno načelo in delovno načelo spektrofotometra omogočata, da se vrednost absorpcije spremeni v določenem območju, to pomeni, da ima instrument določeno natančnost in natančnost. Tako kot natančnost biophotometra Eppendorf ≤ 1,0% (1A). Rezultati teh večkratnih testov se razlikujejo med povprečjem 1,0% in so vsi normalni. Poleg tega je treba upoštevati tudi fizikalno-kemijske lastnosti nukleinske kisline, pH puferja za raztapljanje nukleinske kisline, koncentracijo ionov itd. Med preskusom previsoka koncentracija ionov povzroči tudi odčitavanje drift kot TE, ki bo močno stabiliziral branje. Razredčena koncentracija vzorca je tudi nezanemarljiv dejavnik: zaradi neizogibne prisotnosti majhnih delcev v vzorcu, zlasti vzorcev nukleinske kisline. Prisotnost teh majhnih delcev moti testni učinek. Za zmanjšanje vpliva delcev na rezultate preskusa je potrebna absorbanca nukleinske kisline, ki je vsaj 0,1 A, absorbanca pa je prednostno 0,1-1,5 A. V tem območju ne sme biti mehurčkov v mešanico in v suspenziji ni suspenzije. V nasprotnem primeru se odčitki nasilno zrušijo; Za preskus slepe in vzorec je treba uporabiti isto kolorimetrično skodelico; drugače je razlika v koncentraciji prevelika; pretvorbeni koeficient in enota za koncentracijo vzorca sta enaka; Kiveta, ki jo nosi okno; prostornina vzorca mora presegati zahtevani najmanjši volumen barvne skodelice itd.
Poleg koncentracije nukleinske kisline spektrofotometer istočasno prikazuje nekaj zelo pomembnih razmerij, ki označujejo čistost vzorca, kot je razmerje A260 / A280, da bi ocenili čistost vzorca, ker je absorpcijski vrh proteina je 280 nm. Čisti vzorci imajo razmerje, večje od 1,8 (DNA) ali 2,0 (RNA). Če je razmerje manj kot 1,8 ali 2,0, to kaže na prisotnost beljakovin ali fenolnih snovi. A230 kaže, da v vzorcu obstaja nekaj onesnaževalcev, kot so ogljikovi hidrati, peptidi, fenoli itd. Razmerje čistih nukleinskih kislin A260 / A230 je večje od 2,0. A320 zazna motnost raztopine in druge motnje. Čisti vzorec, A320 je na splošno 0.
Podjetje je specializirano za prodajo spektrofotometrov , dobrodošlih kupcev, ki potrebujejo svetovanje in nakup, vam bomo ponudili iskreno storitev in kakovostne izdelke ter nižje cene.
E-pošta: info@sumerlab.com
Splet: sumerinstrument.com